1、华佗何晟铭饰演、明心李依晓饰演、吴成朱晓渔饰演、胡半仙刘冠麟饰演、喜莲刘芷汐饰演、周瑜李宗翰饰演。
2、华佗一代神医。他乐于治病行医,医术高超,坚持孜孜不倦地进取,研制麻沸散、自创五禽戏、开创外科手术先河,只为更多地减轻患者病痛、强健百姓体魄;他医德高尚,游医天下,免费为穷苦百姓行医治病,深得百姓的尊重与爱戴;身为举世闻名的神医,他视功名于粪土,不把为权贵看病置于为百姓看病之上,甚至因此得罪当权者。
3、明心谯郡县县令之女。与华佗一见钟情,但是由于父亲的阻扰和吴成的故意破坏,两人分手,明心也被吴成下药眼睛失明。县令被人陷害后处死,家道中落的明心陷入悲惨的境地。早已相识的华佗为明心医治眼睛进而让两人再次互生情愫,之后明心一直陪伴在华佗身边。
4、吴成华佗的二师兄。自小与华佗一起学习医术,但是心机深沉为人阴狠,为了达目地他算计师弟、强夺师弟所爱,然后又为逐名利抛弃妻子、好权谋术、欺师灭祖,可谓无所不用其极。与华佗一直针锋相对,想尽办法打击陷害华佗。
5、胡半仙华佗的大师兄,谯郡县的医官。虽然医术高超,但是爱占小便宜有时还会坑蒙拐骗。他习惯游走于市井,悠哉处事、乐观混世的生活态度并不被身边亲朋看好。然而他对率真俏皮的喜莲一往情深,可以毫无保留地倾尽所有。
6、喜莲俏皮泼辣的萌妹子,“野蛮女友”式人物。一直陪伴在明心身边。她率真的性格吸引了胡半仙的注意,此后对其爱得一发不可收拾。最后因卷入曹家内斗,喜莲与胡半仙在刑场结婚,双双下酒后殉情而亡。
7、周瑜东汉末年名将,水军大都督,孙权手下得力将领,一心对抗曹操。周瑜患有失眠病,他广招天下名医都没有医治好,而华佗却手到病除让他免除多日来失眠的痛苦。周瑜知道华佗想去曹营救治瘟疫,于是想华佗软禁起来,却被华佗巧妙逃脱。